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enLwaCas13a Nuclease
| 貨號 | 32137 | 售價（元） | 詢價 |
| 規(guī)格 | 100pmoL/1000pmoL | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品描述
enLwaCas13a（enhanced LwaCas13a）是一種基于野生型LwaCas13a升級改造后獲得的高活力突變體。與野生型LwaCas13a的作用機制一樣，enLwaCas13a可在crRNA引導(dǎo)下特異性識別并剪切靶標(biāo)ssRNA。此外，enLwaCas13a也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性)，即當(dāng)enLwaCas13a蛋白與crRNA、靶標(biāo)RNA結(jié)合形成三元復(fù)合物后，便會被激活針對非特異ssRNA序列的反式剪切活性，并將體系中的任意序列ssRNA序列切碎。該活性也被廣泛用于靶標(biāo)核酸的快速檢測試劑盒的開發(fā)。
產(chǎn)品組分
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組分 |
32137-01 (100 pmol) |
32137-03 (1,000 pmol) |
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100 pmol |
1,000 pmol |
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1 mL |
1 mL |
enLwaCas13a Nuclease (10 μM) 
10 × HOLMES Buffer for Cas13aa. enLwaCas13a Nuclease濃度為10 μM，即10 pmol/μL；100 pmol規(guī)格的總體積為10 μL，1,000 pmol規(guī)格的總體積為100 μL；
保存條件
-80℃或-20℃儲存；干冰運輸。
活性定義
在總體積為20 μL的1 × HOLMES Buffer for Cas13a [pH 7.6]反應(yīng)體系中，37℃反應(yīng)條件下，1 min內(nèi)剪切1 pmol ssRNA探針?biāo)璧腃as13a酶量定義為1 transU。
例：若某批次LwaCas13a酶的反式切割活性為27.0 transU/pmol，則表明1 pmol的該批次LwaCas13a酶可在1 min內(nèi)，在上述指定的反應(yīng)條件下，反式切割27 pmol ssRNA探針。
實驗流程
1. 反式剪切實驗
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × HOLMES Buffer for Cas13a |
2 μL |
1 × |
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10 µM enLwaCas13a Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM crRNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM Target RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM ssRNA Reporter (FAM-BHQ1) |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
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● 反式剪切體系中各組分的用量可以根據(jù)不同的實驗?zāi)康倪M行調(diào)整，用量較少時可先將各組分稀釋后加入體系，enLwaCas13a Nuclease可用1×HOLMES Buffer for Cas13a稀釋，稀釋后需立即使用（若要稀釋后的Cas13酶長期保存，請使用Cas13 Dilution Buffer，#32013），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀釋，但極低濃度的Target RNA（例如LOD實驗）建議用0.1% Tween 20稀釋并使用低吸附的離心管、吸頭等耗材。
實時熒光定量PCR儀檢測熒光信號，37℃反應(yīng)，每30 sec采集一次熒光信號。
注意事項
1. Cas13a的順式剪切(cis-cleavage): Cas13a在crRNA的引導(dǎo)下，特異性地剪切target RNA，且對target RNA的PFS序列要求并不嚴格。
2. Cas13a的反式剪切(trans-cleavage): 當(dāng)target RNA存在時，Cas13a/crRNA與target RNA形成三元復(fù)合物(Cas13a/crRNA/target RNA)，同時，Cas13a被激發(fā)反式剪切活性，將反應(yīng)體系中任意序列的單鏈RNA切碎。
3. 為防止RNase污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為RNase-free。
4. Cas13a蛋白對熱敏感，容易失活，應(yīng)全程冰上配置反應(yīng)體系，并在使用后立即將酶置于-20℃保存。
5. 本公司提供的Cas13a蛋白及反應(yīng)緩沖液不含任何除Cas13a外的任何其它核酸酶活性。
6. 本產(chǎn)品僅供科研使用。