国产精品日韩欧美在线第一页,天码精品专区一区二区三区,波多野结衣电影一区二区三区,欧美日韩一区二区2023,国产精品女上位高潮白浆,精品国产乱码久久久久APP下载,日本中出爆乳在线观看,亚洲1级黄片1级2级

基礎(chǔ)型項(xiàng)目引物篩選邏輯概述

• 收到合成引物后再無(wú)任何陽(yáng)性測(cè)試前提下，進(jìn)行全陰性測(cè)試，確定陰性條帶。

• 首先以質(zhì)粒高、中濃度為模板，例如可選用1pg/μL和10fg/μL進(jìn)行引物初篩，篩選目的條帶特異明顯、條帶顏色亮、雜帶少且陰性正常（無(wú)非特異性條帶，引物二聚體少）的2-3對(duì)引物組合。

• 靈敏度實(shí)驗(yàn)要求模板做3-4個(gè)濃度，各個(gè)濃度的擴(kuò)增條帶呈現(xiàn)靈敏度變化，擴(kuò)增條帶亮度有變化，最終呈現(xiàn)的結(jié)果圖要求最低濃度的檢測(cè)結(jié)果為陰性。最優(yōu)、次優(yōu)引物組合，一般質(zhì)粒靈敏度至少在1fg/μL。

• 將篩到的最優(yōu)、次優(yōu)引物探針進(jìn)行實(shí)際樣本實(shí)驗(yàn)，比較檢驗(yàn)樣本的靈敏度，選出目前最優(yōu)的引物探針，一般假病毒的靈敏度是10³-10?copies/mL，根據(jù)不同項(xiàng)目靈敏度可能存在差異。

• 注意：凝膠電泳的結(jié)果圖最好標(biāo)注maker大小，目的條帶大小

基礎(chǔ)型項(xiàng)目引物篩選邏輯實(shí)際案例

1、每個(gè)項(xiàng)目建議設(shè)計(jì)合成3-6條上下游引物用于后續(xù)篩選。若篩選引物未符合靈敏度要求，可嘗試在靶標(biāo)的其他區(qū)域進(jìn)行設(shè)計(jì)合成引物，再次篩選最終得到最優(yōu)引物組合。

2、本實(shí)驗(yàn)案例在靶標(biāo)上設(shè)計(jì)合成3條上游引物，3條下游引物，共9個(gè)引物組合進(jìn)行示范。

Ø引物篩選1—全陰性驗(yàn)證

• 9組引物組合進(jìn)行全陰性測(cè)試，確定陰性正常。

• 在擴(kuò)增子大小長(zhǎng)度范圍無(wú)明顯條帶。

Ø引物篩選2（正篩）

• 隨機(jī)固定一條上游引物（此實(shí)驗(yàn)選擇F1），與3條下游引物組合；

• 模板選擇高、中、低濃度測(cè)試，選擇條帶明顯、低濃度有擴(kuò)增的引物組合；

• 引物組合F1+R1與F1+ R3相對(duì)較優(yōu)，R1/R3兩條下游引物表現(xiàn)較好；

Ø引物篩選4(靈敏度確認(rèn))

• 確定最優(yōu)引物組合F2+ R1后，進(jìn)行初步靈敏度確認(rèn)；

• 模板濃度的選擇：篩選引物時(shí)能檢出的最低濃度向上/向下選擇1-2個(gè)梯度；

• 最終確認(rèn)環(huán)節(jié)建議加上陰性對(duì)照，確認(rèn)陰性始終正常。

Ø結(jié)果討論

• 最優(yōu)引物組合F2/R1，

• 初步判定質(zhì)粒靈敏度0.1fg/uL。

下一步：

 1、客戶可根據(jù)自身項(xiàng)目需求進(jìn)行引物加入量?jī)?yōu)化、反應(yīng)時(shí)間優(yōu)化等來(lái)提供靈敏度；

 2、特異性交叉驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)；

 3、收集實(shí)際樣本測(cè)試；

 4、與市面上的PCR試劑進(jìn)行靈敏度對(duì)比。

相關(guān)產(chǎn)品：